Категория
Биология
Тип
реферат
Страницы
51 стр.
Дата
01.03.2013
Формат файла
.doc — Microsoft Word
Архив
160786.zip — 42.2 kb
  • konstruirovanie-klonirovanie-i-otbor-rekombinantnyx-molekul-dnk_160786_1.doc — 167 Kb
  • Readme_docus.me.txt — 125 Bytes
Оцените работу
Хорошо  или  Плохо


Текст работы

Конструирование, клонирование и отбор рекомбинантных молекул ДНК

Рассмотрим процесс получения клонированных ДНК. На первом
этапе готовят фрагменты ДНК, пригодные для последующего лигирования с векторной
молекулой. Следующий этап состоит в самом лигировании. Эти процессы
осуществляются in vitro. Далее рекомбинантные молекулы вводят в клетки, где они
амплифицируются путем репликации. Затем проводят клонирование, отбор и
дальнейшую амплификацию.

Вставки

а. Общие положения

При конструировании рекомбинантных молекул обычно используют
сложные смеси потенциальных вставок, и в результате образуется целый набор
клонов, из которого путем скрининга и отбора получают нужные рекомбинантные
молекулы. Скрининг и отбор можно значительно упростить, если обогатить исходную
смесь нужным сегментом; в этом случае для выявления искомого рекомбинанта
приходится проверять значительно меньше рекомбинантных клонов. С одной стороны,
для конструирования рекомбинантных ДНК можно использовать очищенные фрагменты
ДНК, а с другой - само молекулярное клонирование является наиболее простым и эффективным
способом очистки фрагментов. Клонирование представляет собой также наиболее
эффективный способ получения большинства фрагментов геномной ДНК в значительных
количествах.

Существует три источника вставок для клонирования:

1) геномная ДНК, фрагментированная либо с помощью
рестриктирующих эндонуклеаз, либо физическими методами, например с помощью
ультразвука;

2) синтетические фрагменты ДНК, полученные химическим или
ферментативным методом либо путем объединения этих двух методов;



Ваше мнение



CAPTCHA