Категория
Биология
Тип
учебное пособие
Страницы
21 стр.
Дата
01.03.2013
Формат файла
.doc — Microsoft Word
Архив
160248.zip — 156.87 kb
  • pryzhki-po-xromosome_160248_1.doc — 257.5 Kb
  • Readme_docus.me.txt — 125 Bytes
Оцените работу
Хорошо  или  Плохо


Текст работы

Прыжки по хромосоме


Введение

В
последнее десятилетие мы стали свидетелями целой серии ошеломляющих успехов в
области молекулярной биологии. Разработка надежных методов клонирования,
секвенирования и анализа экспрессии эукариотических генов углубила наши
представления о структуре и регуляции активности гена, сделала более понятными
механизмы многих наследственных болезней человека. В это же время быстро
развивались и достигли значительных успехов методы картирования человеческих
генов.

До
недавнего времени существовал некий «провал» в области размеров хромосомных
сегментов от 100 до 5000 т. п.н.; для них не имелось адекватных методов
исследования. Такое положение значительно усложняло интерпретацию данных по
картированию, полученных методами генетики соматических клеток и с помощью
генетического анализа. Сопряжение таких данных с информацией, полученной на
молекулярном уровне, стали называть «обратной генетикой».

В
последние годы было предложено несколько подходов, позволяющих вести
исследования в этой новой области. В настоящей работе описан один из них – метод
«прыжков по хромосоме». С его помощью удается клонировать последовательности
ДНК, значительно удаленные на генетической карте от последовательностей,
гомологичных используемому зонду. Излагаются методики создания библиотек
«хромосомных прыжков» и клонов-связок. Обсуждены преимущества и недостатки
описываемого метода.


1. Область применения метода

Рис. 2
дает представление о размерах хромосомных сегментов, в пределах которых
«работают» различные современные методы генетических исследований. Ось ординат
представляет собой логарифмическую шкалу физических расстояний, измеренных в
парах нуклеотидов. На шкале приведены и значения генетических расстояний,
измеряемые в сантиморганидах. 1 см приблизительно равна 10 8
п.н. Однако это соотношение нельзя считать универсальным, ибо зависимость между
генетическим и физическим расстоянием на хромосоме имеет нелинейный характер,
на нее могут оказывать влияние «горячие точки» рекомбинации. Наличие таких
областей может привести к ситуации, когда сравнительно большому генетическому
расстоянию соответствует небольшой отрезок на физической карте. В то же время в
геноме существуют участки, рекомбинация в которых маловероятна, а это приводит
к обратной ситуации. Как показано на рис. 2, классические методы
молекулярной генетики хорошо работают на последовательностях длиной до 50
г.п.н., что соответствует максимальному размеру вставки в космидный вектор.
Участки большей длины можно клонировать путем «прогулки по хромосоме», когда,
используя уже клонированные последовательности, геномную библиотеку скринируют
с целью получения перекрывающихся клонов. Таким способом удаётся анализировать
последовательности длиной до нескольких сотен т. п.н. Однако, в некоторых
случаях эта процедура может занять очень много времени. Так будет, если какие-то
участки практически не перекрываются из-за наличия протяженной области
повторяющихся последовательностей или последовательностей ДНК, которые не
удается ввести в стандартные векторы. Если известно, что интересующий нас ген
находится на расстояний нескольких сотен т. п.н. от используемого клона,
то применение метода «прогулки по хромосоме» весьма проблематично.




Ваше мнение



CAPTCHA