Категория
Биология
Тип
учебное пособие
Страницы
16 стр.
Дата
01.03.2013
Формат файла
.doc — Microsoft Word
Архив
160152.zip — 96.42 kb
  • polimeraznaja-cepnaja-reakcija_160152_1.doc — 172 Kb
  • Readme_docus.me.txt — 125 Bytes
Рейтинг
10  из 10
Оценок
1
Оцените работу
Хорошо  или  Плохо


Текст работы

Полимеразная цепная реакция


Введение

Полимеразная цепная реакция — это метод амплификации in vitro, с помощью которого в течение нескольких часов можно
выделить и размножить определенную последовательность ДНК в количестве,
превышающем исходное в 10 8 раз. Такая высокая степень направленного
обогащения значительно упрощает использование имеющегося образца ДНК-Некоторые
области применения ПЦР: высокоэффективное клонирование геномных
последовательностей, прямое секвенирование митохондриальной и геномной ДНК,
анализ вариаций нуклеотидных последовательностей и выявление вирусных патогенов.

При амплификации с помощью ПЦР используют два
олигонуклеотидных праймера, фланкирующие интересующий нас участок ДНК; процесс
амплификации заключается в повторяющихся циклах температурной денатурации ДНК,
отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующей
достройки полинуклеотидных цепей с этих праймеров ДНК-полимеразой. Праймеры
ориентированы таким образом, что синтез с помощью полимеразы. протекает только
между ними, удваивая количество копий этого участка ДНК.

В результате происходит экспоненциальное увеличение
количества специфического фрагмента приблизительно по формуле 2 n , где п — число прошедших циклов амплификации. Поскольку праймеры
физически включаются в концы продуктов застройки, они детерминируют сам продукт
реакции — фрагмент ДНК, равный по длине расстоянию между 5'-концами праймеров
на исследуемом участке ДНК. Недавние эксперименты показали, что процесс
амплификации идет гораздо более эффективно, если использовать термостабильную
ДНК-полимеразу, выделенную из бактерии Thermits aquaticus. В отличие от термолабильного фрагмента Клёнова
ДНК-полимеразы I Е. coli, использовавшегося ранее, Год-полимераза сохраняет свою
активность после тепловой денатурации ДНК, и нет необходимости в замене
фермента после каждого цикла. Еще одно достоинство новой полимеразы заключается
в более высоком температурном оптимуме детерминируемой ею реакции, что
значительно повышает специфичность, количественный выход и возможную длину
синтезированных копий интересующей последовательности.



Ваше мнение



CAPTCHA