Категория
Биология
Тип
реферат
Страницы
15 стр.
Дата
09.06.2014
Формат файла
.html — Html-документ
Архив
1031689.zip — 10.21 kb
  • polimeraznaja-cepnaja-reakcija_1031689_1.html — 36.38 Kb
  • Readme_docus.me.txt — 125 Bytes
Оцените работу
Хорошо  или  Плохо


Текст работы

Полимеразная цепная реакция


Введение

Полимеразная цепная реакция — это метод амплификации in vitro, с помощью которого в течение нескольких часов можновыделить и размножить определенную последовательность ДНК в количестве,превышающем исходное в 108 раз. Такая высокая степень направленногообогащения значительно упрощает использование имеющегося образца ДНК-Некоторыеобласти применения ПЦР: высокоэффективное клонирование геномныхпоследовательностей, прямое секвенирование митохондриальной и геномной ДНК,анализ вариаций нуклеотидных последовательностей и выявление вирусных патогенов.

При амплификации с помощью ПЦР используют дваолигонуклеотидных праймера, фланкирующие интересующий нас участок ДНК; процессамплификации заключается в повторяющихся циклах температурной денатурации ДНК,отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующейдостройки полинуклеотидных цепей с этих праймеров ДНК-полимеразой. Праймерыориентированы таким образом, что синтез с помощью полимеразы. протекает толькомежду ними, удваивая количество копий этого участка ДНК.

В результате происходит экспоненциальное увеличениеколичества специфического фрагмента приблизительно по формуле 2n, где п — число прошедших циклов амплификации. Поскольку праймерыфизически включаются в концы продуктов застройки, они детерминируют сам продуктреакции — фрагмент ДНК, равный по длине расстоянию между 5'-концами праймеровна исследуемом участке ДНК. Недавние эксперименты показали, что процессамплификации идет гораздо более эффективно, если использовать термостабильнуюДНК-полимеразу, выделенную из бактерии Thermits aquaticus. В отличие от термолабильного фрагмента КлёноваДНК-полимеразы I Е. coli, использовавшегося ранее, Год-полимераза сохраняет своюактивность после тепловой денатурации ДНК, и нет необходимости в заменефермента после каждого цикла. Еще одно достоинство новой полимеразы заключаетсяв более высоком температурном оптимуме детерминируемой ею реакции, чтозначительно повышает



Ваше мнение



CAPTCHA